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    同時也提高了抗體的利用率，通過優(yōu)化培養(yǎng)工藝可以減少原料抗體的使用量。本發(fā)明避免了原代細胞培養(yǎng)中起始原料細胞中的免*細胞，特別是巨噬細胞、單核細胞和nk細胞等，對目標細胞的adcp/adcc作用，提高了目標細胞的活率和**終產(chǎn)量。特別是當培養(yǎng)和擴增的目標細胞就是巨噬細胞、單核細胞和nk細胞等免*細胞時，終產(chǎn)品中目標細胞的純度和活力的提升更加明顯。本發(fā)明可以提供更高純度、更高活力的目標細胞產(chǎn)品，擴大了細胞產(chǎn)品在科學研究上的應用面，提高了細胞產(chǎn)品在臨床應用上的安全性和有效性。附圖說明圖1為改造實例1中抗人cd16的鼠igg1單克隆抗體3g8重鏈的改造示意圖；圖2為改造實例1中proteina柱層析的清洗和洗脫步驟的紫外吸收曲線圖；圖3為改造實例1中目標蛋白的還原型sds-page電泳檢測圖；圖4為改造實例2中抗人cd52的人源化的igg1型campath-1h單抗重鏈的改造示意圖；圖5為改造實例2中目標蛋白的還原型sds-page電泳檢測圖；圖6為改造實例3中抗人cd3的小鼠igg2a單抗okt3的改造示意圖；圖7為改造實例3中目標蛋白的還原型sds-page電泳檢測圖；圖8為培養(yǎng)實例1中原型抗體okt3與改造實例3制備的acd3-sh對t細胞擴增的活力擬合曲線圖。DMEM高糖培養(yǎng)基適用于長時間細胞培養(yǎng)。1640RPMI細胞培養(yǎng)基供應商家

    空心圓圈)，原型抗體okt3的ed50為130ng/ml(圖8，實心圓)，說明目標細胞t細胞對acd3-sh更加敏感。同時，在飽和抗體濃度下，acd3-sh的**大擴增信號也明顯強于okt3的。結(jié)果顯示，改造抗體acd3-sh明顯具有更高的激發(fā)t細胞擴增的活力。培養(yǎng)實例2nkt細胞培養(yǎng)及抗人cd3抗體的擴增活力檢測本測試分別用改造實例3中獲得的改造抗體acd3-sh和其原型抗體okt3來刺激人pbmc中nkt細胞(cd3+cd56+)的增殖，通過對細胞計數(shù)來比較活力。材料人靜脈血，基礎培養(yǎng)基gt-t551(takara，wk551t)，擴增培養(yǎng)基(gt-t551，il-21000iu/ml)，細胞培養(yǎng)瓶t75(corning，430720)/t175(corning，431080)，ifn-γ(上海凱茂，注射用重組人干擾素γ伽瑪)。細胞培養(yǎng)和檢測方法利用白細胞分離液分離人pbmc細胞，用基礎培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度至2e6/ml，置于培養(yǎng)瓶內(nèi)。在37℃、5％co2培養(yǎng)2小時，以使單核細胞貼壁。收集懸浮細胞，用基礎培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度至1e6/ml。加入重組人ifn-γ(1000iu/ml)。在37℃、5％co2培養(yǎng)24小時。加入抗人cd3抗體(30ng/ml)和il-2(1000iu/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)48小時。按照1:1體積比例添加擴增培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時。之后每隔48小時取樣計數(shù)，用擴增培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度至，繼續(xù)培養(yǎng)。廣東MEM細胞培養(yǎng)基價格減血清培養(yǎng)基減少了血清對細胞培養(yǎng)的干擾。

    結(jié)果表明檢測的msc中cd105、cd90和cd73均為陽性表達，陽性細胞的比例均超過90％，而hla-dr、cd45ra的表達均為陰性，結(jié)果見附圖1。實施例2msc-cm中重要生物活性物質(zhì)的檢測(elisa)以msc培養(yǎng)中**為常見的因子sdf-1α為對象，用定量elisa方法測定msc-cm中sdf-1α因子的測定含量，elisa試劑盒使用r&dsystem公司，(目錄號：dsa00)，檢測過程嚴格按照試劑盒生產(chǎn)廠家所提供的說明書進行，主要步驟簡述如下：①檢測樣品的準備：2種方法制備的凍干msc-cm各取一支，分別用、無熱源的去離子水溶解，取100ul溶解后的msc-cm，加入900ul試劑盒提供的樣品稀釋液，將樣品稀釋10倍，然后取200ul10倍稀釋后的樣品，用試劑盒提供的樣品稀釋液繼續(xù)稀釋2倍，備用；②sdf-1α標準品的制備：按照說明書要求將試劑盒提供的sdf-1α的標準品(100ug/ml)用樣品稀釋液稀釋后得到濃度分別為10000pg/ml、5000pg/ml、2500pg/ml、1250pg/ml、625pg/ml、313pg/ml和156pg/ml的系列標準品；③向試劑盒中提供的elisa板中加入100ul/孔的樣品稀釋液，然后加入100ul/孔上述制備的20倍、40倍和80倍稀釋的msc-cm和sdf-1α標準品，置水平搖床500rpm，室溫孵育2小時；檢測樣品和標準品均設置平行孔。④孵育結(jié)束后。

    如、糖尿病足等)和皮膚**老為目的的化妝品中，吸引了眾多的研究者開發(fā)新的方法與技術(shù)，提高msc-cm的產(chǎn)量，增強其生物學功能，降低產(chǎn)品制備的成本。研究表明鋰離子是一種雙向調(diào)節(jié)的化合物，實驗動物的研究表明適量的鋰元素有助于骨質(zhì)的形成，同時適量的鋰元素對于神經(jīng)細胞也具有保護作用，培養(yǎng)基中低濃度的鋰離子可以促進msc的增殖，而高濃度的鋰離子則會**msc的增殖與分化。普遍認為，鋰離子有助于骨質(zhì)形成與神經(jīng)保護作用是由于鋰離子促進了msc的增殖和分化，而對于是否鋰離子的使用使msc所分泌的活性因子有所增加，改善了細胞生長的微環(huán)境，目前未見報道。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中添加低濃度的氯化鋰將有助于提高msc-cm中活性物質(zhì)的產(chǎn)量?，F(xiàn)有技術(shù)中的間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基用于化妝品的制備方法在使用時，不僅使用效果不好，間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基中含有活細胞，在使用細胞時具有免*排斥、潛在的致*性、不易保存與運輸?shù)热秉c，而且間充質(zhì)干細胞的利用率低，提高了間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基的制備成本。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服以上技術(shù)缺陷，提供一種使用效果好、利用率高、成本低的一種間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基用于化妝品的制備方法。減血清培養(yǎng)基在減少實驗誤差方面表現(xiàn)出色。

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    無血清培養(yǎng)基是用來在無血清條件下生長特殊類型的細胞或進行專門應用的培養(yǎng)基。一般是由基礎培養(yǎng)基和替代血清的補充因子組成。無血清培養(yǎng)基中沒有添加血清，但含有個別蛋白或大量蛋白組分。無血清培養(yǎng)基與無蛋白培養(yǎng)基的區(qū)別在于培養(yǎng)基中沒有添加蛋白，但含有一些動物或植物來源成分，如低分子量肽的水解物。還有一種化學限定培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中不含有蛋白、水解產(chǎn)物或未知結(jié)構(gòu)的組分，所有成分均有已知的化學結(jié)構(gòu)。***：1）未知組分少；2）培養(yǎng)基中不存在血清中的抗體、補體等成分，對培養(yǎng)細胞影響??；3）雜蛋白含量少，生產(chǎn)的產(chǎn)品后期處理較容易，例如*苗生產(chǎn)由于人用*苗需要純化減少雜蛋白，純化過程中成本消耗很大，*苗的損失也很大；4）無血清培養(yǎng)既可以實現(xiàn)細胞的大規(guī)模懸浮培養(yǎng)，增加培養(yǎng)液的利用率，可以采用發(fā)酵罐培養(yǎng)減少了人力消耗。缺點：目前為止不是所有的細胞都能在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。無血清培養(yǎng)基的某些組分價格昂貴，導致無血清無法工業(yè)推廣的主要原因、細胞培養(yǎng)基的質(zhì)量標準和檢測方法水是細胞培養(yǎng)基的溶劑。細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分只有完全溶解于水才能被細胞吸收攝取，細胞才能生長增殖。1640RPMI細胞培養(yǎng)基供應商家