體外培養(yǎng)的上皮細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中,因此培養(yǎng)基應(yīng)能滿足細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分、促生長(zhǎng)因子、、滲透壓、pH等諸多方面的要求。一、營(yíng)養(yǎng)成分維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件一般包括以下幾個(gè)方面:1、氨基酸:是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料。所有細(xì)胞都需要12種必須氨基酸:纈氨酸、亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪、精氨酸、胱氨酸。此外還需要谷氨酰胺,它在細(xì)胞代謝過程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源,同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內(nèi)都含有必需氨基酸。2、單糖:培養(yǎng)中的細(xì)胞可以進(jìn)行有氧與無氧酵解,六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收能力比較高,半乳糖比較低。體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí),幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。3、維生素:主要扮演輔酶、輔基的角色,必不可少。生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B12都是培養(yǎng)基常有的成分。4、無機(jī)離子與微量元素:細(xì)胞生長(zhǎng)除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素,還需要微量元素,如鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。 上皮細(xì)胞培養(yǎng)基有什么特點(diǎn)?上海中喬新舟告訴您。上海尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基滅菌
含血清細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的,在轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)貼壁細(xì)胞時(shí),培養(yǎng)液的粘滯性對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒有多大影響;但在生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉(zhuǎn)速控制及攪拌剪切力對(duì)細(xì)胞造成的損傷程度。表面張力對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有較大的作用,尤其在利用生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮培養(yǎng)時(shí),攪拌和通氣都會(huì)引起泡沫的產(chǎn)生。對(duì)于含血清培養(yǎng)液,由于血清中多種蛋白的存在,攪拌時(shí)產(chǎn)生的氣泡較多,氣泡的上升運(yùn)動(dòng)對(duì)細(xì)胞的損傷程度還有爭(zhēng)議,但氣泡的破裂對(duì)細(xì)胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷,可通過在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加一些保護(hù)劑,降低細(xì)胞-氣體和細(xì)胞-液體的表面張力,減少氣泡的形成。上海尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基滅菌上皮細(xì)胞培養(yǎng)基的特點(diǎn)分析。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!
無蛋白無血清細(xì)胞培養(yǎng)基(proteinfreemidium,PFM)這類培養(yǎng)基完全不含有動(dòng)物來源蛋白,但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段,以及類固醇和脂類前體等,以替代動(dòng)物、生長(zhǎng)因子的作用。其特點(diǎn)是完全沒有蛋白或蛋白含量極低,有利于生物制品的分離純化。2)化學(xué)組份限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基(Chemicallydefinedmedia,CDM)此類培養(yǎng)基是目前安全、為理想的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基,所有成份的濃度都完全明確,即使其所添加的少量蛋白,也是可經(jīng)過純化處理,成份明確、濃度確定的蛋白。這類培養(yǎng)基較為理想地減少了生產(chǎn)的可變性,提高了生產(chǎn)工藝的重復(fù)性,并有效降低了純化成本。
無污染體外生長(zhǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力,因此培養(yǎng)基應(yīng)達(dá)到無化學(xué)物質(zhì)污染、無微生物污染(如細(xì)菌、、支原體、病毒等)、無其他對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染(如抗體、補(bǔ)體)。對(duì)于天然培養(yǎng)基,污染主要來源于取材過程及生物材料本身,應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格選材,嚴(yán)格操作。對(duì)于合成培養(yǎng)基,污染主要來源于配制過程,配制所用的水,器皿應(yīng)十分潔凈,配制后應(yīng)嚴(yán)格過濾除菌??蒲袑?shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級(jí)胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。Ausbian®特級(jí)胎牛血清所有血清出廠前,均經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控,每個(gè)批次附有詳細(xì)完整的《檢測(cè)報(bào)告》,包括:品名,貨號(hào),批號(hào),血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)、無菌檢查(細(xì)菌、、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等)、促細(xì)胞生長(zhǎng)能力、細(xì)胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。 上皮細(xì)胞培養(yǎng)基如何選擇?上海中喬新舟告訴您。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!
細(xì)胞培養(yǎng)基常用幾種重要的添加成份及使用過程中應(yīng)注意的問題酚紅在細(xì)胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑。一般情況下,可以通過酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值,但低血清或是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同,不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗(yàn)來判定pH值,建議使用pH計(jì)進(jìn)行測(cè)定。酚紅通常對(duì)含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生明顯影響,也可通過純化技術(shù)去除,但酚紅在無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng),此外還具有調(diào)節(jié)滲透壓的作用。通常產(chǎn)品使用說明中的碳酸氫鈉推薦量是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)、安全量,是在科學(xué)的基礎(chǔ)上根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)所得。但是由于不同的細(xì)胞系(株)不同,同一株細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境也可能不同(細(xì)胞耐受性不同等),且存在的地域性水質(zhì)差異等,在實(shí)際生產(chǎn)過程中也可稍作改動(dòng),但使用者需做相應(yīng)的檢測(cè)(理化及細(xì)胞生產(chǎn)試驗(yàn)等)。 上皮細(xì)胞培養(yǎng)基的制作方法難嗎?上海中喬新舟告訴您。上海尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基滅菌
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獲取細(xì)胞系可以通過原代細(xì)胞建立自己的培養(yǎng)系,或者也可選擇從商業(yè)供應(yīng)商或者非盈利性供應(yīng)單位(即細(xì)胞庫(kù))處購(gòu)買已經(jīng)建立的細(xì)胞系。聲譽(yù)良好的供應(yīng)單位可提供質(zhì)量的細(xì)胞系,而且會(huì)認(rèn)真地對(duì)細(xì)胞系進(jìn)行檢測(cè),以確保其完好性,并且未被污染。我們不建議從其他實(shí)驗(yàn)室借用細(xì)胞,因?yàn)檫@會(huì)帶來很高的污染風(fēng)險(xiǎn)。無論來源如何,使用細(xì)胞之前都應(yīng)確保所有新到細(xì)胞系已經(jīng)過支原體污染檢測(cè)。培養(yǎng)環(huán)境細(xì)胞培養(yǎng)的一大優(yōu)勢(shì)在于能夠控制細(xì)胞生長(zhǎng)的物理化學(xué)環(huán)境(即:溫度、pH值、滲透壓、O2和CO2濃度)和生理環(huán)境(即:和營(yíng)養(yǎng)素濃度)。除溫度外,培養(yǎng)環(huán)境均由生長(zhǎng)培養(yǎng)基控制。上海尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基滅菌
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1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理)人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。