慢病毒載體(Lentiviralvector)較逆轉(zhuǎn)錄病毒載體有更廣的宿主范圍,慢病毒能夠有效感ran非周期性和有絲分裂后的細(xì)胞。慢病毒載體能夠產(chǎn)生表達(dá)shRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性細(xì)胞、干細(xì)胞、受精卵以及分化的后代細(xì)胞中表達(dá)shRNA,實(shí)現(xiàn)在多種類型的細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達(dá)的功能性沉默,為在原代的人和動(dòng)物細(xì)胞組織中快速而高效地研究基因功能,以及產(chǎn)生特定基因表達(dá)降低的動(dòng)物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者,不但具備特異性地使基因表達(dá)沉默的能力,而且充分發(fā)揮了慢病毒載體自身所具備的優(yōu)勢(shì),為基因功能的研究提供了更強(qiáng)有力的工具。慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果。對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,使用慢病毒載體,能大da提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大da增加,能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長(zhǎng)期、穩(wěn)定表達(dá)。磷酸化特異性ELISA試劑盒專為研究信號(hào)通路中涉及的細(xì)胞內(nèi)蛋白的研究人員而設(shè)計(jì)。凝膠回收試劑盒
中喬新舟CCK-8細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)試劑盒(Cell Counting Kit-8)產(chǎn)品特點(diǎn):1.進(jìn)行高通量操作的同時(shí)大da簡(jiǎn)化操作步驟,不需要進(jìn)行移液、離心或預(yù)標(biāo)記等步驟;2.通過使用試劑盒配備的stopsolution,能隨意終止顏色反應(yīng),控制實(shí)驗(yàn)條件;3.避免使用放射性同位素,保證實(shí)驗(yàn)安全性;4.具有很高的準(zhǔn)確度;5.低細(xì)胞數(shù)目(小于100個(gè)細(xì)胞/孔)檢測(cè)也能保證良好的線性范圍及靈敏度;6.使用96或384孔板進(jìn)行操作,節(jié)省實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間,能同時(shí)進(jìn)行大量樣本檢測(cè)。
凝膠回收試劑盒驗(yàn)證miRNA對(duì)靶基因的調(diào)控是否真正的存在,*常用的方法就是熒光素酶報(bào)告基因。
1996年第yi次報(bào)道其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是一個(gè)包含有11個(gè)β折疊的“桶”形結(jié)構(gòu),發(fā)色團(tuán)隱藏在結(jié)構(gòu)的中心,不被水溶劑猝滅。這種緊密排列的結(jié)構(gòu)對(duì)整個(gè)GFP蛋白是很重要的,它幾乎可以完全維持熒光活性;少量的斷裂是可以平衡的,少量的點(diǎn)突變也是可以接受的。與當(dāng)時(shí)的傳統(tǒng)熒光染料相比,GFP的主要優(yōu)勢(shì)在于它無毒,并且可以在活細(xì)胞中表達(dá),從而能夠用于研究動(dòng)態(tài)的生理過程。
幾乎就在它的序列被闡明的同時(shí),科學(xué)家們就開始通過誘導(dǎo)突變來設(shè)計(jì)新的綠色熒光蛋白版本。1995年,RogerY.Tsien描述了一個(gè)S65T點(diǎn)突變,該突變?cè)黾恿薌FP的熒光強(qiáng)度和光穩(wěn)定性。這也使其主激發(fā)峰從395nm轉(zhuǎn)移到488nm,有效地改善了野生型蛋白的缺陷,促進(jìn)了其在研究中的廣泛應(yīng)用。自那以后,許多其他的突變被引入到綠色熒光蛋白中,新的熒光團(tuán)迭代不斷地被設(shè)計(jì)出來。
隨著病毒生物學(xué)的發(fā)展,種類繁多的病毒載體已越來越成為向各種實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(如細(xì)胞系、原代細(xì)胞、組織臟器等)轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的重要工具。除了在實(shí)驗(yàn)室的組織培養(yǎng)和動(dòng)物模型生產(chǎn)中發(fā)揮重要作用,它們還被用于zhi 療遺傳性疾病的臨床試驗(yàn)中。目前主流的病毒載體系統(tǒng)主要包括慢病毒(LV)、(γ-)逆轉(zhuǎn)錄病毒(RV)、腺病毒(Ad)和腺相關(guān)病毒(AAV)。我們分述之。慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒均屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科。其典型特征為其RNA基因組能逆轉(zhuǎn)錄為cDNA副本,cDNA副本又能穩(wěn)定整合至宿主細(xì)胞基因組中(這就是常說的穩(wěn)轉(zhuǎn))。逆轉(zhuǎn)錄病毒通常分兩種:簡(jiǎn)單的(有時(shí)又稱為致ai病毒或γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒,如鼠白血病病毒)和復(fù)雜的(如慢病毒)。這些亞型間主要的差異在于復(fù)雜的逆轉(zhuǎn)錄病毒存在一些附屬基因和調(diào)控基因,而簡(jiǎn)單的則沒有(下文有進(jìn)一步的討論)。這兩類病毒顆粒都含有兩份正鏈RNA,RNA上附有病毒反轉(zhuǎn)錄酶(RT),它們位于病毒的內(nèi)核(圖1)。位于內(nèi)核的還有結(jié)構(gòu)蛋白和酶,包括核殼(NC)、衣殼(CA)、整合酶(IN)和蛋白酶(PR)。內(nèi)核由一圈外周蛋白層包圍,外周蛋白包括基質(zhì)蛋白(MA),基質(zhì)蛋白又被來源于宿主細(xì)胞細(xì)胞膜插有包膜糖蛋白的腹膜所包圍。做細(xì)胞遷移和侵襲、細(xì)胞黏附、細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性等實(shí)驗(yàn)時(shí),想監(jiān)測(cè)細(xì)胞變化,能看到細(xì)胞遷移的整個(gè)過程。
細(xì)胞生物學(xué)(cellbiology)是在顯微、亞顯微和分子水平三個(gè)層次上,研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能和各種生命規(guī)律的一門科學(xué)。細(xì)胞生物學(xué)由cytology發(fā)展而來,Cytology是關(guān)于細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能(特別是染色體)的研究?,F(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)從顯微水平,超微水平和分子水平等不同層次研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能及生命活動(dòng)。細(xì)胞生物學(xué)是一切生命科學(xué)的*為重要的基礎(chǔ)學(xué)科之一。同時(shí)又是生命科學(xué)的生長(zhǎng)點(diǎn),反映了生物科學(xué)發(fā)展的*新成就。細(xì)胞生物學(xué)是以細(xì)胞為研究對(duì)象,從細(xì)胞的整體水平、亞顯微水平、分子水平等三個(gè)層次,以動(dòng)態(tài)的觀點(diǎn),研究細(xì)胞和細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和功能、細(xì)胞的生活史和各種生命活動(dòng)規(guī)律的學(xué)科。細(xì)胞生物學(xué)是現(xiàn)代sheng命科學(xué)的前沿分支學(xué)科之一,主要是從細(xì)胞的不同結(jié)構(gòu)層次來研究細(xì)胞的生命活動(dòng)的基本規(guī)律。從生命結(jié)構(gòu)層次看,細(xì)胞生物學(xué)位于分子生物學(xué)與發(fā)育生物學(xué)之間,同它們相互銜接,互相滲透。我們的產(chǎn)品范圍較廣,涵蓋了大量分泌型循環(huán)蛋白,如細(xì)胞因子、趨化因子和生長(zhǎng)因子,用于免疫學(xué)和炎癥研究。凝膠回收試劑盒
ELISA試劑盒標(biāo)本凝集不全時(shí),血清中會(huì)殘留部分纖維蛋白原,也易造成假陽性。凝膠回收試劑盒
CCK-8試劑(Cell Counting Kit-8 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑 [1] )中含有WST–8:化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan),生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣fan用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗**藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。凝膠回收試劑盒
上海中喬新舟生物科技有限公司
1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理)人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。