實驗步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時不要扎破血管，打的結(jié)不要包進太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進血管，里面的針時會出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準備給予灌流液1，同時剪開肝門靜脈，灌注時間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時間很重要，兩次灌注時嚴格保持針不要動，否則容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

實驗步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時不要扎破血管，打的結(jié)不要包進太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進血管，里面的針時會出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準備給予灌流液1，同時剪開肝門靜脈，灌注時間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時間很重要，兩次灌注時嚴格保持針不要動，否則容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

肝細胞作為細胞移植慢性肝衰竭的種子細胞以及作為藥物篩選的靶細胞，制備和培養(yǎng)大規(guī)模的、高活力的肝細胞是這些研究的基本環(huán)節(jié)。因此肝細胞的分離和培養(yǎng)技術(shù)正日益受到人們關(guān)注，成為當前研究的熱點。目前肝細胞的分離方法有機械分離法、螯合法和酶消化法等。機械法操作簡單，但分離獲得的肝細胞數(shù)量少、活性差。howard創(chuàng)建了膠原酶灌流法，seglen進一步將這種方法發(fā)展為兩步灌流法。膠原酶灌流法得到的肝細胞數(shù)量和活性都得到提高，灌流法廣泛應(yīng)用于大鼠、小鼠、犬和兔等動物。但此方法對肝組織塊的體積要求較大，不適用于手術(shù)切除的不規(guī)則小塊人肝組織，無法滿足基礎(chǔ)研究中對人肝細胞的需求。因此，急需建立一種簡單、...

幾種慢性肝病(CLD)，包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)，引起肝細胞損傷和壞死，進而引發(fā)炎癥和以細胞外基質(zhì)(ECM)積累為特征的傷口愈合反應(yīng)。如果損傷是急性的或自限性的，傷口愈合反應(yīng)會迅速恢復(fù)正常組織穩(wěn)態(tài)和肝臟結(jié)構(gòu)。然而，如果損傷持續(xù)存在，隨之而來的慢性炎癥和ECM積累會超過肝臟再生的能力，導(dǎo)致纖維化并終導(dǎo)致肝硬化，這是一種預(yù)后不佳的肝臟疾病，也是發(fā)展為肝細胞(HCC)的主要危險因素。原代肝細胞的服務(wù)價格更優(yōu)惠。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！北京兔肝細胞新西蘭大白兔原代肝細胞購買 培養(yǎng)的原代肝細胞正常時是什么形狀的？大約要多久才能...

細胞傳代的基本原則代謝的有毒物質(zhì)會隨時間在細胞培養(yǎng)液中累積。當擴增細胞時，尤為重要的是經(jīng)常更換培養(yǎng)液以維持細胞健康和監(jiān)測細胞擴增情況以避免細胞生長過度。傳代的細胞通常分為三個主要類型：腫瘤細胞系、永生化細胞系、干細胞系。永生化細胞系是那些來自多細胞生物的細胞通過一些突變修飾改變了細胞周期調(diào)控從而可以無限繁殖的細胞。與永生化的細胞系相反，干細胞系通常從成人和胚胎組織的可自我更新的多能細胞中分離得到。這些細胞,如您在短片中看到的人類胚胎干細胞,在適當?shù)臈l件下也能無限傳代培養(yǎng)。細胞在優(yōu)化條件下可以懸浮培養(yǎng)，如從血液中分離到的永生化細胞,或者貼壁培養(yǎng)，如許多從組織中分離的細胞系。貼壁細胞的...

幾種慢性肝病(CLD)，包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)，引起肝細胞損傷和壞死，進而引發(fā)炎癥和以細胞外基質(zhì)(ECM)積累為特征的傷口愈合反應(yīng)。如果損傷是急性的或自限性的，傷口愈合反應(yīng)會迅速恢復(fù)正常組織穩(wěn)態(tài)和肝臟結(jié)構(gòu)。然而，如果損傷持續(xù)存在，隨之而來的慢性炎癥和ECM積累會超過肝臟再生的能力，導(dǎo)致纖維化并終導(dǎo)致肝硬化，這是一種預(yù)后不佳的肝臟疾病，也是發(fā)展為肝細胞(HCC)的主要危險因素。上海中喬新舟 原代肝細胞的優(yōu)勢。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！青海比格犬原代肝細胞購買 高活力原代小鼠肝細胞的分離與純化，目的建立一種穩(wěn)定的能獲得高活力和高...

現(xiàn)在您知道了如何傳代細胞，讓我們再來看看傳代的一些不同應(yīng)用。前面已經(jīng)提到，人胚胎干細胞是一類必須傳代的細胞。它們通常與小鼠成纖維細胞MEF共培養(yǎng)，后者能提供幫助干細胞保持其多能性的因子。生長于飼養(yǎng)細胞上的干細胞到了合適的發(fā)育階段時需挑出來。可用微型移液管挑出或用玻璃工具輕輕將其刮下然后接種于新的培養(yǎng)液中進行擴增。有一些細胞系對酶消化敏感，或者貼壁很緊無法使用胰酶處理來重懸。細胞刮常用來輕輕將細胞從培養(yǎng)板的底部刮下來。如果細胞貼壁特別緊，可加入培養(yǎng)液或適當溶液后用血清吸管用力刮擦。使用該方法時要小心，細胞比較脆弱，容易在這種機械剝離的方法中受損。為了更快并可重復(fù)性的大量擴增細胞到超過...

不能用手觸及已消毒器皿瓶口、瓶塞內(nèi)部，吸管前部等所有可能與細胞接觸的部分，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。開啟、關(guān)閉長有細胞的培養(yǎng)瓶時，火焰滅菌時間要短。防止因溫度過高燒死細胞。換液時傾倒廢液，瓶口不能接觸廢液缸，速度不能過快，防止廢液四濺。吹打細胞時，要注意邊角的細胞是否吹打下來。手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上，即不可以在開放容器上方操作。每次操作只處理一株細胞，以免造成細胞交叉污染。注意自身的安全，對于來自人源性或病毒的細胞株應(yīng)特別小心。操作過程中，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如DMSO，并避免尖銳物品傷人等。從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細...

細胞傳代的基本原則代謝的有毒物質(zhì)會隨時間在細胞培養(yǎng)液中累積。當擴增細胞時，尤為重要的是經(jīng)常更換培養(yǎng)液以維持細胞健康和監(jiān)測細胞擴增情況以避免細胞生長過度。傳代的細胞通常分為三個主要類型：腫瘤細胞系、永生化細胞系、干細胞系。永生化細胞系是那些來自多細胞生物的細胞通過一些突變修飾改變了細胞周期調(diào)控從而可以無限繁殖的細胞。與永生化的細胞系相反，干細胞系通常從成人和胚胎組織的可自我更新的多能細胞中分離得到。這些細胞,如您在短片中看到的人類胚胎干細胞,在適當?shù)臈l件下也能無限傳代培養(yǎng)。細胞在優(yōu)化條件下可以懸浮培養(yǎng)，如從血液中分離到的永生化細胞,或者貼壁培養(yǎng)，如許多從組織中分離的細胞系。貼壁細胞的...

然而，這些復(fù)雜的方法無法進行大規(guī)模的實驗，在2D單層培養(yǎng)中維持分化的PHH依然重要。在這方面，近測試了一組化學(xué)物質(zhì)，而且鑒定了5種補充劑的一個組合（5C-medium，5C培養(yǎng)基），包括Forskolin（腺苷酸環(huán)化酶抑制劑），SB431542(TGF-β抑制劑)，IWP2（Wnt抑制劑），DAPT(Notch抑制劑)以及LDN193189(BMP抑制劑)，可以維持PHH分化狀態(tài)30天。不同于DMSO處理需要14天，F(xiàn)orskolin可以在72h內(nèi)誘導(dǎo)HepaRG細胞發(fā)生功能性極化。SB431542和DAPT也被用于在3D培養(yǎng)條件下使肝祖細胞樣細胞分化，并用HBV它們。盡管這些發(fā)現(xiàn)...

高活力原代小鼠肝細胞的分離與純化，目的建立一種穩(wěn)定的能獲得高活力和高純度原代小鼠肝細胞的分離和純化方法.方法對傳統(tǒng)的兩步原位膠原酶灌注法進行4個方面的優(yōu)化,主要包括選擇逆向灌流,將持續(xù)灌注法改為間斷灌注后夾閉門靜脈法,嚴格控制膠原酶消化時間和將分離的肝細胞懸液進行低速Percoll單密度離心純化.分離后的肝細胞進行體外培養(yǎng).肝細胞活力和得率用臺盼藍染色法檢測.結(jié)果新鮮分離的小鼠原代肝細胞活力能穩(wěn)定達到87%±3%,平均活細胞總數(shù)為8×10^5每克小鼠體重,絕大部分細胞在體外培養(yǎng)2h后貼壁生長.結(jié)論優(yōu)化后的肝細胞分離方法更為穩(wěn)定,有效,分離到的肝細胞具有高活力的優(yōu)點. 原代肝細胞的應(yīng)用范圍十...

在細胞實驗中，通過原代分離實驗得到的原代細胞，與永生化的細胞系相比，能夠忠實模擬體內(nèi)生理狀態(tài)和功能，屬于“高階”的細胞模型，但是獲得高純度的原代細胞是一個非常艱巨的過程，科學(xué)合理的原代細胞提取和培養(yǎng)方法對于任何實驗室都是一筆不可多得的財富。上次小編整理了脂肪原代細胞提取的教程，得到了大家的一致好評。應(yīng)廣大讀者要求，小編快馬加鞭“肝”出了小鼠原代肝細胞的提取“密鑰”，趕緊收好~肝臟是人體“”代謝，在包括葡萄糖、蛋白質(zhì)和脂肪等多種物質(zhì)代謝過程中發(fā)揮重要作用。肝臟參與多種生理病理過程，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)。肝臟中的細胞主要分為實質(zhì)細胞和非實質(zhì)細胞兩類：實質(zhì)細胞的占比達到整個肝...

實驗步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時不要扎破血管，打的結(jié)不要包進太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進血管，里面的針時會出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準備給予灌流液1，同時剪開肝門靜脈，灌注時間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時間很重要，兩次灌注時嚴格保持針不要動，否則容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

原代肝細胞體外培養(yǎng)48h后，參照文獻[20-21]報道的方法誘導(dǎo)脂肪變性細胞模型。設(shè)置不同濃度(0～)的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，F(xiàn)FA混合物與含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基充分混勻后按濃度順序依次加入六孔板中，置于37℃、含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后油紅O染色，觀察細胞內(nèi)脂滴沉積情況，并采用全自動生化分析儀檢測肝細胞內(nèi)TG含量。油紅O染色步驟：棄去六孔板中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液清洗1～2次，加入油紅O固定液固定20～30min；棄去固定液，加入新鮮配制的油紅O染液染色10～20min；60%的異丙醇浸洗1～2min，三蒸水清洗2～3次直至無多余染液；...

肝臟原位灌注法：（為分離肝細胞的經(jīng)典方法）1，在38度-39度的水浴槽中預(yù)熱hepes緩沖液和膠原酶液，使其在肝內(nèi)達到37度。2，給大鼠（180-200g）腹腔注射巴比妥鈉100ul/100g，從古靜脈注射肝素1000u，打開腹腔，在門靜脈的肝外5mm處松松的放一個結(jié)扎線環(huán)，將血管套管插入至肝掌，結(jié)扎，快速切開肝下血管與面壓力過高，關(guān)注500ml無鈣hepes緩沖液，流速為30ml/min，數(shù)秒鐘肝臟即變白。3，灌注300ml膠原酶液，流速15ml/min，持續(xù)20min。肝臟腫大。4，切下肝臟。用hepes緩沖液沖洗。切開肝纖維囊，收集消化清洗液被并混入100mlleibovit...

細胞傳代的基本原則代謝的有毒物質(zhì)會隨時間在細胞培養(yǎng)液中累積。當擴增細胞時，尤為重要的是經(jīng)常更換培養(yǎng)液以維持細胞健康和監(jiān)測細胞擴增情況以避免細胞生長過度。傳代的細胞通常分為三個主要類型：腫瘤細胞系、永生化細胞系、干細胞系。永生化細胞系是那些來自多細胞生物的細胞通過一些突變修飾改變了細胞周期調(diào)控從而可以無限繁殖的細胞。與永生化的細胞系相反，干細胞系通常從成人和胚胎組織的可自我更新的多能細胞中分離得到。這些細胞,如您在短片中看到的人類胚胎干細胞,在適當?shù)臈l件下也能無限傳代培養(yǎng)。細胞在優(yōu)化條件下可以懸浮培養(yǎng)，如從血液中分離到的永生化細胞,或者貼壁培養(yǎng)，如許多從組織中分離的細胞系。貼壁細胞的...