山東化學(xué)高通量篩選

一種廣泛應(yīng)用的HTS技術(shù)是熒光各向異性（FA）/熒光偏振光（FP）。FA和FP方法實(shí)際上通過(guò)測(cè)量了染料所經(jīng)歷的旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間或翻滾時(shí)間的變化來(lái)表征分子量。在這些技術(shù)中，用偏振光激發(fā)熒光團(tuán)，并用平行或垂直于入射光偏振的偏振器測(cè)量熒光發(fā)射。隨著時(shí)間的推移，染料標(biāo)記的分子下降，發(fā)射信號(hào)去極化。與大分子結(jié)合降低了熒光團(tuán)的遷移率，從而增加了極化或各向異性，并允許定量結(jié)合。根據(jù)所涉及的質(zhì)量，選擇染料的壽命以比較大化結(jié)合后的信號(hào)變化。熒光素和羅丹明等有機(jī)染料的壽命約為3-4ns，它們?cè)谶B接到分子量在0.5-10kDa范圍內(nèi)的生物分子時(shí)為敏感。什么叫高通量篩選生化。山東化學(xué)高通量篩選

開(kāi)發(fā)一種新藥的過(guò)程可能是漫長(zhǎng)、復(fù)雜和不確定的，但從社會(huì)、科學(xué)和經(jīng)濟(jì)的角度來(lái)看，它也可能是高回報(bào)的。高通量篩選(HTS)已經(jīng)成為藥物發(fā)現(xiàn)的主要工具。，向大家介紹目前用于靶標(biāo)確認(rèn)的幾種HTS方法，主要分為兩大類(lèi):生化水平和細(xì)胞水平。生化水平分析包括比率熒光法（FA/FP）、熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）、時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)等；細(xì)胞水平的分析包括細(xì)胞活力、報(bào)告基因、第二信使和高內(nèi)涵成像等。生化篩選利用純化的目標(biāo)蛋白，在體外測(cè)定配體的結(jié)合或酶活性的抑制。這些檢測(cè)通常在384孔板中以競(jìng)爭(zhēng)的形式進(jìn)行，其中所研究的化合物必須取代已知的配體或底物。天津流式細(xì)胞高通量篩選高通量篩選的檢測(cè)技術(shù)。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是指在兩個(gè)不同的熒光基團(tuán)中，如果一個(gè)熒光基團(tuán)（供體Donor）的發(fā)射光譜與另一個(gè)基團(tuán)（受體Acceptor）的吸收光譜有一定的重疊，當(dāng)這兩個(gè)熒光基團(tuán)間的距離合適時(shí)，就可觀察到熒光能量由供體向受體轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，即以前一種基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)激發(fā)時(shí)，可觀察到后一個(gè)基團(tuán)發(fā)射的熒光。常見(jiàn)的供體-受體對(duì)之間的有效距離通常為2-6nm，適用于許多蛋白質(zhì)相互作用。染料通常是有機(jī)分子，如與蛋白質(zhì)偶聯(lián)的熒光素和羅丹明，或與感興趣的蛋白質(zhì)融合的熒光蛋白。

微生物菌種的改造是現(xiàn)代微生物發(fā)酵行業(yè)中，提高其工業(yè)化生產(chǎn)性能，提高酶和菌的性能非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。而快速高效的高通量篩選方法的建立又是菌株改造中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。以下介紹的是高通量快速篩選方法中一個(gè)環(huán)節(jié)的內(nèi)容，如果想建立快速篩選方法，還需要有其他方面的工作要做。何為高通量快速篩選方法？就是通過(guò)將需要篩選的表型（高酶活，某種物質(zhì)的高產(chǎn)量）和一種能夠方便被人眼或者儀器快速識(shí)別并判斷高低的物質(zhì)或者信號(hào)想關(guān)聯(lián)，而建立起來(lái)的篩選方法。高通量篩選技術(shù)的靶點(diǎn)是。

高通量藥物篩選的一個(gè)基本假設(shè)是：只要嘗試了足夠多的化合物，總能找到一個(gè)具有某種生化活性的化合物。篩選的化合物越多，獲得具有良好生化活性的先導(dǎo)化合物的機(jī)率就越大。因此，一個(gè)龐大的化合物庫(kù)也是高通量篩選不可或缺的部分。藥物研發(fā)與開(kāi)發(fā)是一個(gè)復(fù)雜與漫長(zhǎng)的過(guò)程，特別是小分子藥物的研發(fā)，其難點(diǎn)和關(guān)鍵在于如何快速高效的找到先導(dǎo)化合物（LeadCompound）。采用高通量藥物篩選（High-throughputscreening，HTS）來(lái)發(fā)現(xiàn)新的先導(dǎo)化合物仍然是小分子藥物研發(fā)的優(yōu)先。小分子垂釣等高通量篩選。山東化學(xué)高通量篩選

高通量篩選菌種實(shí)驗(yàn)。山東化學(xué)高通量篩選

在報(bào)告基因檢測(cè)(也稱(chēng)為信號(hào)通路檢測(cè))中，報(bào)告蛋白的序列編碼是在相關(guān)通路的轉(zhuǎn)錄控制下引入的。通過(guò)熒光或光學(xué)讀數(shù)監(jiān)測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)，通過(guò)這些指標(biāo)來(lái)間接反應(yīng)啟動(dòng)子的或抑制程度。觀察到的信號(hào)是整個(gè)通路的產(chǎn)物，篩選的化合物可以在該通路上的任何點(diǎn)相互作用。常見(jiàn)的報(bào)告基因是CAT（氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶）、GAL（β-半乳糖苷酶）、LAC（β-內(nèi)酰胺酶）、LUC（熒光素酶）和GFP。我們通常使用的為L(zhǎng)UC（熒光素酶），但也可以使用其他報(bào)告基因。山東化學(xué)高通量篩選