其局限性:① ELISA數(shù)據(jù)不能提供單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生因子的能力和頻率;②因受刺激細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生是短暫的,并且不同細(xì)胞因子基因的表達(dá)動(dòng)力學(xué)可以變化,故可能需要在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集測試樣品以更好地表征實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或培養(yǎng)細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生。③在任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測量的細(xì)胞因子蛋白濃度可能反映細(xì)胞因子分泌,細(xì)胞因子攝取的并發(fā)過程。通過細(xì)胞和細(xì)胞因子蛋白降解。由于這些過程,測量的細(xì)胞因子蛋白水平可能xian zhu低估細(xì)胞的實(shí)際細(xì)胞因子產(chǎn)生潛力。④試劑不統(tǒng)一,標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一,故定量不準(zhǔn)確等。ELISA試劑盒可提供多種形式,可檢測胞內(nèi)和胞外的蛋白質(zhì)。流式細(xì)胞術(shù)檢測
化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)勢1.靈敏度高:靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性?;瘜W(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出放射性免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質(zhì),對(duì)疾病的早期診斷具有十分重要的意義。2.寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍:發(fā)光強(qiáng)度在4-6個(gè)量級(jí)之間,與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色酶聯(lián)免疫分析吸光度(OD值)2.0的范圍相比,優(yōu)勢明顯。雖然同位素放射免疫也有較寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍,但是放射性限制其應(yīng)用。3.光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長:化學(xué)發(fā)光免疫分析的光信號(hào)持續(xù)時(shí)間可達(dá)數(shù)小時(shí)甚至一tian,簡化了實(shí)驗(yàn)操作及測量。4.分析方法簡便快速:絕大多數(shù)分析測定jin需加入一種試劑(或符合制劑)的一步模式。5.結(jié)果穩(wěn)定、誤差?。簶颖颈旧戆l(fā)光,不需要額外光源,避免了外來因素的干擾(光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器),分析結(jié)果穩(wěn)定可靠。6.安全性好及使用期長:到目前為止還未發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑的危害性;另外這些試劑穩(wěn)定,保存期可達(dá)一年之久。細(xì)胞侵襲保證了ELISA檢測的靈敏度,重復(fù)性,特異性。
CCK-8試劑(Cell Counting Kit-8 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑 [1] )中含有WST–8:化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan),生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣fan用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗**藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。驗(yàn)證miRNA對(duì)靶基因的調(diào)控是否真正的存在,*常用的方法就是熒光素酶報(bào)告基因。
慢病毒表達(dá)載體,即通常所說的穿梭載體,包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細(xì)胞的感ran,目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后,經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄,整合到基因組,從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。本試劑盒可以檢測穩(wěn)定的,細(xì)胞內(nèi)的乳酸脫氫酶,當(dāng)細(xì)胞受損時(shí),這種酶會(huì)被釋放出來。水質(zhì)檢測
以GFP作為標(biāo)記的質(zhì)??商娲股鷖u的作用,可以幫助識(shí)別哪些細(xì)胞成功地轉(zhuǎn)染了質(zhì)粒。流式細(xì)胞術(shù)檢測
ELISA是一種基于酶的免疫測定方法,由于酶標(biāo)的放大作用,利用酶標(biāo)記抗體的免疫檢測,因其高特異性和敏感性而日益受到人們的青睞。細(xì)胞因子夾心ELISA是一種敏感的酶免疫分析方法,可以特異性地檢測和定量可溶性細(xì)胞因子和趨化因子蛋白的濃度。這一方法的基本原理是:①將已知抗體結(jié)合到某種固相載體表面;②加待測抗原,如兩者是特異的,則發(fā)生結(jié)合,然后把多余抗體洗除;③加入與待測抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體,使形成“夾心”;④加入該酶的底物,若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生,說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原,利用酶標(biāo)儀測其OD值。有色產(chǎn)物的量與待測抗原的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。流式細(xì)胞術(shù)檢測
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1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級(jí)代理)人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測試劑盒、細(xì)胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。