細(xì)胞毒性是由合成化合物、細(xì)胞自然產(chǎn)生毒性或免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞等)引起的細(xì)胞殺傷事件。目前主要通過對受損細(xì)胞釋放的相關(guān)底物(如乳酸脫氫酶-LDH)進(jìn)行定量,從而判斷細(xì)胞膜的受損情況。本期，將為大家講解有關(guān)細(xì)胞毒性的檢測產(chǎn)品、原理及特點等內(nèi)容。 細(xì)胞增殖及毒性檢測是生物相容性測試的一種，檢測藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過檢測材料或者藥物對細(xì)胞的增殖或者生長的影響，來評價藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、抗**藥效測定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測，另外也可以通過Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)...

眾所周知，ai細(xì)胞有它們自己獨特的增殖方式，它是一種在幾乎所有ai癥類型中但不在正常的細(xì)胞中觀察到的精明的代謝重編程。 在一篇發(fā)表在2016年10月Cell Reports期刊上的文章“Addiction to Coupling of the Warburg Effect with Glutamine Catabolism in Cancer Cells”中，研究人員shou次證實導(dǎo)致ai癥的突變?nèi)绾慰刂坪透淖僡i細(xì)胞進(jìn)行生物合成和復(fù)制的方式。 幾十年來，人們已知ai細(xì)胞以一種令人吃驚的速率從血液中攝取葡萄糖。在這篇文章中研究人員發(fā)現(xiàn)：盡管葡萄糖是主要的能量來源并且是正常細(xì)胞進(jìn)...

源于病毒的載體系統(tǒng)作為基因遞送工具已經(jīng)在基因和細(xì)胞zhi liao領(lǐng)域應(yīng)用了多年。已經(jīng)有多種類型的病毒載體類型可以選擇使用，其中，基因和細(xì)胞zhi liao領(lǐng)域*常使用的是慢病毒（LV）、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒（GRV）、腺病毒（AV）以及腺相關(guān)病毒（AAV）。分別源于小鼠白血病病毒和HIV的γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（GRVV）和慢病毒載體（LVV）是*常使用的兩種逆轉(zhuǎn)錄病毒。針對特定的應(yīng)用選擇病毒載體系統(tǒng)時需要考慮的主要因素包括zhi liao性GOI（目的基因）的負(fù)載量（插入大?。?、免疫原性、細(xì)胞趨向性和被靶細(xì)胞攝取的效率、基因表達(dá)的持續(xù)時間以及規(guī)?；a(chǎn)的簡單性。Thomas等曾總結(jié)介紹過不同...

注意事項：1、酚紅和血清對CCK-8法的檢測不會造成干擾，可以通過減去空白孔中本底的吸光度而消除。2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，不注意的話容易產(chǎn)生漏加或多加。3、當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，培養(yǎng)板*外一圈的孔容易干燥揮發(fā)，導(dǎo)致體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，*外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。4、金屬對CCK-8顯色有影響：終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會5%、15%、90%的抑zhi顯色反應(yīng)，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM，將會100%抑zhi顯色反應(yīng)。5、部分懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量并延長培養(yǎng)時間。CCK-8試劑盒可以...

His標(biāo)簽是當(dāng)前*流行的標(biāo)簽蛋白。His標(biāo)簽是指六個組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。當(dāng)某一個標(biāo)簽的使用，一是能構(gòu)成表位利于檢測；二是構(gòu)成獨特的結(jié)構(gòu)特征（結(jié)合配體）利于純化。其特點可總結(jié)為以下幾點：1.標(biāo)簽的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分別為~26KD和~30KD，一般不影響目標(biāo)蛋白的功能；2.His標(biāo)簽融合蛋白可以在非離子型表面活性劑存在的條件下或變性條件下純化，前者在純化疏水性強的蛋白得到應(yīng)用，后者在純化包涵體蛋白時特別有用，用高濃度的變性劑溶解后通過金屬螯和親和層析去除雜蛋白，使復(fù)性不受其它蛋白的干擾，或進(jìn)行金屬螯和親和層析復(fù)性；3.His...

慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞等，并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中，從而大da增加了轉(zhuǎn)染效率，并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)若干代，可以進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。因為是隨機整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點整合技術(shù)，將靶基因定點整合到基因組特定的部位，從而保證其高效表達(dá)并且對細(xì)胞不產(chǎn)生隨機整合可能產(chǎn)生的傷害。 慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細(xì)胞...

逆轉(zhuǎn)錄病毒是含有單鏈RNA基因組雙拷貝的囊膜RNA病毒。囊膜在決定宿主細(xì)胞(HC)特異性方面起著非常重要的作用。囊膜蛋白通過直接的膜融合或由囊膜糖蛋白與宿主靶細(xì)胞上的同源受體結(jié)合而促進(jìn)的受體介導(dǎo)內(nèi)吞作用，幫助細(xì)胞進(jìn)入。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是基因zhi liao和細(xì)胞zhi liao的熱門選擇，因為它可以通過整合到宿主細(xì)胞基因組中，而實現(xiàn)長期穩(wěn)定的基因表達(dá)。然而，整合也存在風(fēng)險，整合可能導(dǎo)致插入突變，致使原ai基因上調(diào)，使宿主細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(GRVV)傾向于在接近基因調(diào)節(jié)的區(qū)域整合，如轉(zhuǎn)錄起始位點，這比傾向于整合到基因本體中的慢病毒載體具有更高的遺傳毒性風(fēng)險。γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體與...

WST-1細(xì)胞活力和增殖檢測試劑盒描述： 通過存在于活細(xì)胞中的琥珀酸四唑還原酶將四唑鎓鹽還原成有色甲compounds化合物，提供了測量細(xì)胞活力和增殖的靈敏且準(zhǔn)確的方法。然而，*常用的四唑鹽MTT[3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物]的缺點是由MTT產(chǎn)生的甲dye染料極不溶于水，因此分光光度定量需要額外的提取步驟。ScienCell WST-1細(xì)胞活力和增殖測定使用四唑鹽WST-1[2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺苯基）-2H四唑]。WST-1在代謝活性細(xì)胞上產(chǎn)生高度水溶性的福爾馬贊，允許直接和用戶友好的細(xì)胞活力和...

自然殺傷（NK）細(xì)胞在識別和殺死**和病毒感ran的先天和后天免疫反應(yīng)中扮演著關(guān)鍵的角色。因此，已有許多研究嘗試研發(fā)在體外激huo和擴增NK細(xì)胞的方法，以用于和免疫細(xì)胞相關(guān)研究，而目前的方法包括使用細(xì)胞因子、化學(xué)試劑以及飼養(yǎng)細(xì)胞1，其中細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性中具有核xin作用。據(jù)報道，IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21和IFN-γ被歸類為NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性和增殖的活化細(xì)胞因子，并增強NK細(xì)胞對各種**的細(xì)胞毒性作用2。然而，這些激huoNK細(xì)胞的細(xì)胞因子組合仍需研究人員進(jìn)一步優(yōu)化。CCK-8試劑盒可以用于生物活性因子的活性檢測，抗**藥物的篩選，細(xì)胞...

慢病毒載體的研究發(fā)展得很快，研究的也非常深入。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達(dá)到持久性表達(dá)。在感ran能力方面可有效地感ran神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、**細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而達(dá)到良好的的基因zhi liao效果，在美國已經(jīng)開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。慢病毒也被廣fan地應(yīng)用于表達(dá)RNAi的研究中。由于有些類型細(xì)胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效果差，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)的siRNA半衰期短，體外合成siRNA對基因表達(dá)的抑zhi作用通常是短暫的，因而使其應(yīng)用受到較大的限制。采用事先在體外構(gòu)建能夠表達(dá)siRNA的載體，然后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄siR...

自然殺傷（NK）細(xì)胞在識別和殺死**和病毒感ran的先天和后天免疫反應(yīng)中扮演著關(guān)鍵的角色。因此，已有許多研究嘗試研發(fā)在體外激huo和擴增NK細(xì)胞的方法，以用于和免疫細(xì)胞相關(guān)研究，而目前的方法包括使用細(xì)胞因子、化學(xué)試劑以及飼養(yǎng)細(xì)胞1，其中細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性中具有核xin作用。據(jù)報道，IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21和IFN-γ被歸類為NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性和增殖的活化細(xì)胞因子，并增強NK細(xì)胞對各種**的細(xì)胞毒性作用2。然而，這些激huoNK細(xì)胞的細(xì)胞因子組合仍需研究人員進(jìn)一步優(yōu)化。使用ELISA讀數(shù)器對溶解的甲臜產(chǎn)物進(jìn)行分光光度計量化。胰島素試劑盒細(xì)胞增...

1.慢病毒生物學(xué)慢病毒生存所需的基本基因是gag、pol和env；gag編碼結(jié)構(gòu)蛋白，pol編碼逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶，env編碼病毒包膜糖蛋白。所有逆轉(zhuǎn)錄病毒都有相似的生命周期。當(dāng)成熟病毒通過直接膜融合或通過包膜糖蛋白與靶細(xì)胞表面同源受體結(jié)合而介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞時，生命周期就開始了。融合之后是脫殼過程，在此階段，一些病毒蛋白（包括部分Gag亞基）從病毒核xin解離。病毒RNA經(jīng)過復(fù)雜的多步逆轉(zhuǎn)錄過程轉(zhuǎn)化為前病毒雙鏈DNA。該前病毒DNA與病毒蛋白形成復(fù)合物，進(jìn)入細(xì)胞核并整合到宿主基因組中。整合過程由關(guān)鍵的病毒蛋白（例如整合酶）和內(nèi)源性宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子（例如LEDGF）輔助完成。野生型慢病毒的前...

免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何優(yōu)zhi的診斷試劑離不開優(yōu)zhi的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。堿性磷酸酶染色測定試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可檢測PSC中的堿性磷酸酶。Absolute Mouse Telomere Length Quantificatio...

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很...

端粒是染色體末端的重復(fù)核苷酸元素，保護染色體免受降解和遺傳信息丟失。正常二倍體細(xì)胞在每個細(xì)胞周期中都會丟失端粒。因此，端粒長度隨著時間的推移而減少，并可能預(yù)測壽命。端?？s短對健康狀況有負(fù)面影響，并與許多健康問題有關(guān)，包括衰老和ai癥。端粒長度的準(zhǔn)確、一致的定量在染色體不穩(wěn)定、DNA修復(fù)、衰老、凋亡、細(xì)胞功能紊亂和zhong瘤發(fā)生等細(xì)胞生物學(xué)的許多方面都具有重要意義。 ScienCell的絕dui人類端粒長度定量qPCR檢測試劑盒（AHTLQ）旨在直接測量人類細(xì)胞群的平均端粒長度。端粒引物集識別并放大端粒序列。單拷貝參考（SCR）引物集識別并放大人類17號染色體上一個100 bp長的區(qū)...

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)勢1.靈敏度高：靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出放射性免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質(zhì)，對疾病的早期診斷具有十分重要的意義。2.寬的線性動力學(xué)范圍：發(fā)光強度在4-6個量級之間，與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色酶聯(lián)免疫分析吸光度（OD值）2.0的范圍相比，優(yōu)勢明顯。雖然同位素放射免疫也有較寬的線性動力學(xué)范圍，但是放射性限制其應(yīng)用。3.光信號持續(xù)時間長：化學(xué)發(fā)光免疫分析的光信號持續(xù)時間可達(dá)數(shù)小時甚至一tian，簡化了實驗操作及測量。4.分析方法簡便快速：絕大多數(shù)分析測定jin需加入一種試劑（或符合制劑）的一步模式。5.結(jié)果穩(wěn)定、...

1.慢病毒生物學(xué)慢病毒生存所需的基本基因是gag、pol和env；gag編碼結(jié)構(gòu)蛋白，pol編碼逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶，env編碼病毒包膜糖蛋白。所有逆轉(zhuǎn)錄病毒都有相似的生命周期。當(dāng)成熟病毒通過直接膜融合或通過包膜糖蛋白與靶細(xì)胞表面同源受體結(jié)合而介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞時，生命周期就開始了。融合之后是脫殼過程，在此階段，一些病毒蛋白（包括部分Gag亞基）從病毒核xin解離。病毒RNA經(jīng)過復(fù)雜的多步逆轉(zhuǎn)錄過程轉(zhuǎn)化為前病毒雙鏈DNA。該前病毒DNA與病毒蛋白形成復(fù)合物，進(jìn)入細(xì)胞核并整合到宿主基因組中。整合過程由關(guān)鍵的病毒蛋白（例如整合酶）和內(nèi)源性宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子（例如LEDGF）輔助完成。野生型慢病毒的前...

自然殺傷（NK）細(xì)胞在識別和殺死**和病毒感ran的先天和后天免疫反應(yīng)中扮演著關(guān)鍵的角色。因此，已有許多研究嘗試研發(fā)在體外激huo和擴增NK細(xì)胞的方法，以用于和免疫細(xì)胞相關(guān)研究，而目前的方法包括使用細(xì)胞因子、化學(xué)試劑以及飼養(yǎng)細(xì)胞1，其中細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的活性中具有核xin作用。據(jù)報道，IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21和IFN-γ被歸類為NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性和增殖的活化細(xì)胞因子，并增強NK細(xì)胞對各種**的細(xì)胞毒性作用2。然而，這些激huoNK細(xì)胞的細(xì)胞因子組合仍需研究人員進(jìn)一步優(yōu)化。GFP可以標(biāo)記轉(zhuǎn)基因修飾的ES細(xì)胞，然后可以將其用于轉(zhuǎn)入小鼠并產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小...

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)勢1.靈敏度高：靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出放射性免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質(zhì)，對疾病的早期診斷具有十分重要的意義。2.寬的線性動力學(xué)范圍：發(fā)光強度在4-6個量級之間，與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色酶聯(lián)免疫分析吸光度（OD值）2.0的范圍相比，優(yōu)勢明顯。雖然同位素放射免疫也有較寬的線性動力學(xué)范圍，但是放射性限制其應(yīng)用。3.光信號持續(xù)時間長：化學(xué)發(fā)光免疫分析的光信號持續(xù)時間可達(dá)數(shù)小時甚至一tian，簡化了實驗操作及測量。4.分析方法簡便快速：絕大多數(shù)分析測定jin需加入一種試劑（或符合制劑）的一步模式。5.結(jié)果穩(wěn)定、...

來源于生物體內(nèi)的熒光素，常見的有螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶和Guassia熒光素酶。這些熒光素酶作為“報告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中，這種技術(shù)被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法（LuciferaseAssay）。跟普通融合蛋白標(biāo)簽不同，使用熒光素酶構(gòu)建的報告基因可用作目的基因的定量分析。因此常用于研究啟動子、miRNA3'UTR克隆的功能與調(diào)控，因為它們對目的基因的調(diào)控可以是漸變的，而不是簡單的開和關(guān)兩種狀態(tài)。優(yōu)點：靈敏度高，檢測幅度寬；不是哺乳動物細(xì)胞內(nèi)源性基因；重復(fù)性好；與HTS兼容等。螢火蟲和海腎熒光素酶已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于協(xié)同報告并進(jìn)行均一化研究。由于它們都是快速，容易和高靈敏的監(jiān)測...

慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞等，并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中，從而大da增加了轉(zhuǎn)染效率，并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)若干代，可以進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。因為是隨機整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點整合技術(shù)，將靶基因定點整合到基因組特定的部位，從而保證其高效表達(dá)并且對細(xì)胞不產(chǎn)生隨機整合可能產(chǎn)生的傷害。 慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細(xì)胞...

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)是一種快速檢測臨床和實驗樣品中蛋白質(zhì)含量的方法，根據(jù)研究需求，有許多方式可供選擇，如直接ELISA，間接ELISA，競爭性ELISA和夾心ELISA等。ELISA是生物學(xué)實驗常用的一種技術(shù)，其具有快速、易于操作等優(yōu)點，但當(dāng)條件不合適時，其往往不能給出*佳的結(jié)果，不能保持一致性和可復(fù)制性。 ELISA是Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay的簡稱，即酶聯(lián)免疫吸附測定，是研究蛋白抗體的重要方法。它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶進(jìn)行直接或間接結(jié)合，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，進(jìn)行定性和定量分析。1971年Engva...

眾所周知，ai細(xì)胞有它們自己獨特的增殖方式，它是一種在幾乎所有ai癥類型中但不在正常的細(xì)胞中觀察到的精明的代謝重編程。 在一篇發(fā)表在2016年10月Cell Reports期刊上的文章“Addiction to Coupling of the Warburg Effect with Glutamine Catabolism in Cancer Cells”中，研究人員shou次證實導(dǎo)致ai癥的突變?nèi)绾慰刂坪透淖僡i細(xì)胞進(jìn)行生物合成和復(fù)制的方式。 幾十年來，人們已知ai細(xì)胞以一種令人吃驚的速率從血液中攝取葡萄糖。在這篇文章中研究人員發(fā)現(xiàn)：盡管葡萄糖是主要的能量來源并且是正常細(xì)胞進(jìn)...

其局限性：① ELISA數(shù)據(jù)不能提供單個細(xì)胞產(chǎn)生因子的能力和頻率；②因受刺激細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生是短暫的，并且不同細(xì)胞因子基因的表達(dá)動力學(xué)可以變化，故可能需要在幾個時間點收集測試樣品以更好地表征實驗動物或培養(yǎng)細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生。③在任何一個時間點測量的細(xì)胞因子蛋白濃度可能反映細(xì)胞因子分泌，細(xì)胞因子攝取的并發(fā)過程。通過細(xì)胞和細(xì)胞因子蛋白降解。由于這些過程，測量的細(xì)胞因子蛋白水平可能xian zhu低估細(xì)胞的實際細(xì)胞因子產(chǎn)生潛力。④試劑不統(tǒng)一，標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，故定量不準(zhǔn)確等。ELISA試劑盒可提供多種形式，可檢測胞內(nèi)和胞外的蛋白質(zhì)。流式細(xì)胞術(shù)檢測化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)勢1.靈敏度高：靈敏度高是化學(xué)...

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)是一種快速檢測臨床和實驗樣品中蛋白質(zhì)含量的方法，根據(jù)研究需求，有許多方式可供選擇，如直接ELISA，間接ELISA，競爭性ELISA和夾心ELISA等。ELISA是生物學(xué)實驗常用的一種技術(shù)，其具有快速、易于操作等優(yōu)點，但當(dāng)條件不合適時，其往往不能給出*佳的結(jié)果，不能保持一致性和可復(fù)制性。 ELISA是Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay的簡稱，即酶聯(lián)免疫吸附測定，是研究蛋白抗體的重要方法。它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶進(jìn)行直接或間接結(jié)合，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，進(jìn)行定性和定量分析。1971年Engva...

Elisa試劑盒對于間接ELISA標(biāo)本般都要進(jìn)行稀釋，如果加樣不準(zhǔn)就會造成誤差，尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時，很小的絕dui誤差，會導(dǎo)致較大的相對誤差，使陰性（或弱陽性）標(biāo)本呈陽性（或陰性）。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。目，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本，可較好地避免以上誤差。 在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健步，ELISA試劑盒應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作，得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān)，ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與...

實驗注意事項：建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會干擾OD值讀數(shù)。白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時間。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時，貼壁細(xì)胞的*小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。如果沒有450nm的濾光片，可...

與正常細(xì)胞相比，ai細(xì)胞的代謝機制會發(fā)生變化，以滿足增殖的需求，使其成為判斷ai變的一個重要因素。ai細(xì)胞內(nèi)代謝的改變增加了其大分子的生物合成，創(chuàng)出了新的微環(huán)境以應(yīng)對活性氧 (ROS) 的增加。這種代謝改變背后的驅(qū)動因素包括基因表達(dá)的改變以及代謝酶活性的改變。 代謝檢測是一個復(fù)雜的過程，為了簡化繁瑣的操作，快速獲得數(shù)據(jù)，各種檢測試劑盒應(yīng)運而生。Abcam也提供各類代謝檢測試劑盒，科研用戶只需通過酶標(biāo)儀、顯微鏡或流式細(xì)胞儀，就可直接讀取活細(xì)胞、裂解液和生物流體樣本的數(shù)據(jù)即可。 ELISA開發(fā)試劑盒含有開發(fā)免疫檢測所需的抗體對和基本組分。與單獨購買抗體和蛋白質(zhì)相比它們更加經(jīng)濟實惠。人星形...

熒光素(Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，其中*有代表性的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶，分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)，可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗證等方向研究。熒光素酶的具體應(yīng)用，主要有以下兩個方面：(一)：pGL3-Basic---用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點與...

ELISA是一種基于酶的免疫測定方法，由于酶標(biāo)的放大作用，利用酶標(biāo)記抗體的免疫檢測，因其高特異性和敏感性而日益受到人們的青睞。細(xì)胞因子夾心ELISA是一種敏感的酶免疫分析方法，可以特異性地檢測和定量可溶性細(xì)胞因子和趨化因子蛋白的濃度。這一方法的基本原理是：①將已知抗體結(jié)合到某種固相載體表面；②加待測抗原，如兩者是特異的，則發(fā)生結(jié)合，然后把多余抗體洗除；③加入與待測抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體，使形成“夾心”；④加入該酶的底物，若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原，利用酶標(biāo)儀測其OD值。有色產(chǎn)物的量與待測抗原的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。良好光穩(wěn)定性：克服了...